PRÁCTICA Nº9: ESTREPTOLISINA O LIOFILIZADA

FUNDAMENTO

El carácter inmunogénico de la SLO permite valorar la extensión de una infección estreptocócica, por simple titulación del nivel en suero de anticuerpos anti-SLO. La causa bacteriana más frecuente de faringitis aguda  y de ciertas infecciones cutáneas y sistémicas es debido a Streptococcus pyogenes (estreptococo del grupo A, β-hemolíticos), pudiendo acarrerar fiebre reumática y glomerulonefritis aguda postestreptocócica.

OBJETIVO

Determinar el título de anti- SLO, para diagnóstico "in vitro".

UTILIDAD CLÍNICA

La esteptolisina O tiene carácter antigénico y en la clínica, la técnica serológica más utilizada para detectar la infección estreptocócica del grupo A, es la titulación de los anticuerpos antiestreptolisina O en suero humano.

REACTIVOS

Estreptolisina O liofilizada

Tampón fosfato pH 6,5

Hematíes grupo O (suspensión al 3%)

MATERIAL NECESARIO

Placa de microtiter

Micropipetas de 25 y 50 microlitros y puntas correspondientes.

SSF.

MUESTRA

Suero mío congelado.

PROCEDIMIENTO

Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.

*Comenzaremos rehidratando con agua destilada el vial de estreptolisina liofilizada, mezclandolo suavemente y justo antes de realizar las determinaciones.

*Nosotros para esta pruba vamos a utilizar el micrométodo, para ello simplemente prepararemos las siguientes diluciones del suero del paciente:

0,2 ml suero + 1,8 ml tampón (1:10) 0,1 ml suero + 2,4 ml tampón (1:25)

Realizamos los siguientes pasos:

1. Dispensamos 50 μL de tampón en cada pocillo de dos filas de la placa. 2. Añadimos 50 μL de la dilución 1:10 al primer pocillo de la fila A. 3. Añadimos 50 μL de la dilución 1:25 al primer pocillo de la fila B. 4. A partir del primer pocillo efectuamos sucesivas diluciones con la ayuda de una pipeta, por pases de 50 μL (Dejamos el último pocillo de cada fila para control). 5. Añadir 25 μL de disolución de estreptolisina O rehidratada a todos los pocillos excepto en el último (nº 10) de la fila B. 6. Agitamos suavemente e incubamos 15 min/37º C. 7. Añadimos 25 μL de suspensión de hematíes al 3% a cada pocillo. 8. Agitamos suavemente e incubamos 45 min/37º C, agitando después de los primeros 15 min. 9. Centrifugamos a 1000-1500 rpm/2 min o dejar sedimentar durante unos 50-60 min a temperatura ambiente.Nosotros lo dejamos sedimentar.

10. Los controles estarán formados por las siguientes cantidades (además de los 50 μL del tampón que le hemos añadido antes):

Estreptolisina O: 25 μL de SLO + 25 μL de suspensión de hematíes al 3 % (Fila A).

Hematíes: 25 μL tampón + 25 μL de suspensión de hematíes 3% (Fila B).

En la siguiente imágen se puedever el procedimiento más claro.

Al finalizar cada práctica el puesto de trabajo se debe limpiar/desinfectar adecuadamente con una mezcla de agua, lejia y jabón.

RESULTADOS

En mi caso la práctica fue erronea debido a que una pipeta estaba rota y no se pipeteo bien. Había exceso.

Muestro el resultado de mis compañeras en la que el título se distuingue claramente.

Se observa como en la fila A (dilución suero 1/10) el título corresponde con el pocillo nº 5 = 1/320, ya que es el último que no presenta hemólisis. Nuestro título es de 320.

En la fila B (dilución suero 1/10) el título corresponde con el pocillo nº 4 = 1/400, ya que es el último que no presenta hemólisis. Nuestro título es de 400.

*Este título se mide en Unidades Todd. Los valores normales están comprendidos entre 160-250 Unidades Todd, por lo que nuestro suero problema presenta claramente infección estreptocócica.*