FUNDAMENTO
Ensayo en fase sólida de inmunoadsorción unido a enzimas (ELISA), basado en el principio del sándwich. Los pocillos de las placas están recubiertos con un anticuerpo monoclonal dirigido contra un único foci antigénico en una molécula de TSH. Se incuba una alícuota de una muestra perteneciente a un paciente que contiene TSH endógena en los pocillos recubiertos con el enzima conjugado, que es un anticuerpo anti- TSH conjugado con la peroxidasa endógena. Después de la incubación se lava el conjugado que no se ha unido. La cantidad de peroxidasa unida es proporcional a la concentración de TSH en la muestra. Cuando se añade la solución del sustrato de la peroxidasa, la intensidad del color desarrollado es proporcional a la concentración de TSH en la muestra del paciente.
OBJETIVO/UTILIDAD CLÍNICA
EL objetivo es la determinación de TSH mediante la técnica de enzimoinmunoensayo ELISA.
MUESTRA
Suero o plasma
REACTIVOS
Enzyme Conjugate (Conjugado enzimático), 1 vial, 12 mL, listo para usar.
Anticuerpo anti-TSH conjugado con la Peroxidasa de rábano; Contiene conservante sin mercurio.
Substrate Solution (Solución de sustrato), 1 vial, 12 mL, listo para usar, Tetrametilbencidina (TMB).
Stop Solution (Solución de parada), 1 vial, 14 mL, listo para usar, contiene 0.5 M H2SO4, Evitar el contacto con la Solución de parada. Puede causar irritación y quemaduras en al piel.
Wash Solution (Solución de lavado), 1 vial, 25 mL (concentrado 40X).
MATERIAL NECESARIO
KIt provisto TSH ELISA
Micropipetas de precisión variable calibradas.
Papel absorbente.
Agua destilada.
APARATAJE
Lector de microplacas calibrado.
PROCEDIMIENTO
Asegurar el número deseado de pocillos en el recipiente.
2. Dispensar 25 µL de cada Standard, Control y muestras con puntas nuevas en los pocillos adecuados.
3. Incubar durante 10 minutes a temperatura ambiente.
4. Dispensar 100 µL de Enzyme Conjugate a cada pocillo. Mezclar totalmente durante 10 segundos. Es importante mezclar completamente en este paso.
5. Incubar durante 90 minutes a temperatura ambiente.
6. Sacudir enérgicamente el contenido de los pocillos. Lavar los pocillos 5 veces con Wash Solution diluida (300 µL por pocillo). Realizar un golpe seco de los pocillos contra el papel absorbente para eliminar las gotas residuales. Nota importante: La sensibilidad y la precisión de este ensayo se ve marcadamente influenciada por la realización correcta del proceso de lavado!
7. Adicionar 100 µL de Substrate Solution a cada pocillo.
8. Incubar durante 20 minutes a temperatura ambiente.
9. Parar la reacción enzimática mediante la adición de 100 µL de Stop Solution a cada pocillo.
10. Leer la OD a 450 ± 10 nm con un lector de microplacas dentro de los 5 minutos después de la adición de la Stop Solution.
RESULTADOS
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