FUNDAMENTO
Esta práctica consiste en realizar una técnica de aglutinación en tubo para la detección y semicuantificación de anticuerpos anti-Salmonella, Brucella y Proteus en suero humano. Los reactivos (suspensiones bacterianas coloreadas y estandarizadas), aglutinan en presencia del anticuerpo homólogo correspondiente en las muestras ensayadas.
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica es observar si hay aglutinación o no en presencia de antígenos bacterianos
UTILIDAD CLÍNICA
El diagnóstico de enfermedades febriles puede establecerse bien sea por el aislamiento del microorganismo en sangre, orina o heces o por la demostración del título de anticuerpos específicos, somáticos (O) y flagelares (H) en el suero del paciente. La determinación de estos anticuerpos forma las bases para el ensayo de Widal que establece que altos niveles de anticuerpos O y H superiores a 1/100 en suero, es indicativo de infección por estos microorganismos.
MUESTRA
Suero fresco, estable 8 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
REACTIVOS
Antígeno flagelar.
Antígeno somático.
Control +.
Control -.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
Nosotros vamos a realizar el método de aglutinación en tubo (semicuantificación):
Prepararemos una serie de tubos, tal como se muestra en la imagen.Preparamos 6 tubos para Ag flagelar y 6 tubos para Ag somático.
Como muestra usaremos el frasco de antígenos febriles.
Lo que haremos es una serie de diluciones de la muestra, para semicuantificarla.
El siguiente paso es preparar 2 tubos más para el control positivo y el negativo: 0,1 mL control + 0,9 mL de solución salina.
A continuación añadiremos una gota (50 microlitros) de antígeno a cada tubo de los 6 tubos (diferenciando los tubos de flagelar F y somático S.
Agitamos para homogeneizar e incubamos a 37ºC durante 24 horas.
RESULTADOS
El título es el último tubo que presenta aglutinación. El control positivo debe presentar aglutinación y el control negativo no, por lo que se verá todo el líquido coloreado.
El color rojo se corresponde con al Ag flagelar, en este caso aglutino hasta el segundo tubo cuya dilución y título es 1/40.
El color morado se corresponde con al Ag somático, en este caso aglutino hasta el segundo tubo cuya dilución y título es 1/80.
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