FUNDAMENTOS
PCR-Turbilátex es un ensayo turbidimétrico para la cuantificación de proteína C-reactiva (PCR) en suero o plasma humano. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana, son aglutinadas por PCR presente en la muestra del paciente. El proceso de aglutinación provoca un cambio de absorbancia proporcional a la concentración de PCR de la muestra, y por comparación con un calibrador de PCR de concentración conocida se puede determinar el contenido de PCR en la muestra ensayada.
OBJETIVO
Averiguar la concentración de PCR presente en el suero.
UTILIDAD CLÍNICA
La Proteína C-reactiva es una proteína de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayoría de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12-24 horas. Esta técnica se usa para el estudio y seguimiento de diversas enfermedades.
REACTIVOS
Diluyente (R1) -> Tampón tris 20 mmol/L, pH 8,2.
Látex (R2) -> Partículas de látex cubiertas de IgG de cabra anti-PCR humana, pH, 7,3.
CRP-CAL -> Calibrador. La concentración de PCR viene indicada en la etiqueta del vial
MUESTRA
Suero fresco, estable 7 días a 2-8ªC o 3 meses a -20ºC.
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Byosystem BTS-310
Espectofotómetro de absorción Thermo electron
MATERIAL NECESARIO
Pipetas de 5, 800 y 200 µL con sus correspondientes puntas de pipetas.
Porta.
Recipiente estéril para los desechos.
SSF.
Cubetas
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
1. Calentar los reactivos y el fotómetro (portacubetas) a 37ºC.
2. Condiciones del ensayo:
-Longitud de onda: 540 nm (530 – 550)
-Temperatura: 37ºC
-Paso de luz de la cubeta: 1 cm.
3. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada (blanco).
4. Pipetear en una cubeta:
Diluyente R1 800µL
Látex R2 200 µL
Calibrador o muestra 5,0 µL
5. Mezclar y leer la absorbancia frente al blanco.
CALCULOS
(A2-A1)muestra* concentración del calibrador/ (A2-A1) calibrador = (0,98*0,94)*64/(0,86-0,82)= 64 mg/L.
RESULTADO
Tras aplicar la fórmula anterior obetemos que la concentración es 64 mg/L.
El valor de referencia de este laboratorio es de 6 mg/L.
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