FUNDAMENTO:
En el plasma el Fe se haya prácticamente en su totalidad unido a la Transferrina (TF)
Esta determinación normalmente se realiza por métodos colorimétricos que consisten en separar el Fe de la TF y posteriormente hacerlo reaccionar con una sustancia cromógena, un derivado de la fenantrolina. La intensidad del color obtenido se mida espectrofotométricamente y nos indica la [Fe] presente en el suero problema.
En este método en concreto, se usa un medio ácido en el cual el hierro es liberado de la TF (Transferrina) y se reduce a hierro ferroso mediante ácido ascórbico. El Fe reacciona con la tripiridiltriazina (TPTZ) formando un compuesto azulado cuyo pico de absorción es a 595 nm.
OBJETIVO:
El objetivo de esta técnica es la determinaciín de hierro en el suero sanguíneo
UTILIDAD CLÍNICA:
El hierro sérico no presenta un valor constante, y puede variar significativamente en pocos días. Existen, además variaciones horarias (más alta por la mañana), relacionadas con el ciclo menstrual, el embarazo y los anticonceptivos.
El hierro sérico es hierro en tránsito y por tanto, su medida no informa sobre depósitos o sobre el hierro que forma parte de la Hb
Existen muchos métodos para determinar el hierro sérico, pero son los colorimétricos los mas utilizados.
MATERIALES:
Pipetas
Tubos de ensayo
Pipeta Pateur
Micropipetas con puntas.
APARATAJE
Centrífuga
Espectrofotómetro
REACTIVOS:
Reactivo 1: Tampón citrato pH 2.2
Reactivo 2: Ácido ascórbico en polvo
Reactivo 3: Tripiridil-Triazina
Estándar: Solución de Hierro
MUESTRA:
Suero o plasma heparinizado
PROCEDIMIENTO:
Importante ponerse la bata y preparar el puesto de trabajo
1. Obtener el suero dela muestra mediante centrifugación
2. Extraer con una pipeta Pasteur el sobrenadante obtenido y lo depositamos en un tubo de ensayo
3. Mezclar el reactivo 2 (agente reductor) y el reactivo 1 (tampón), se le pone la fecha, es estable 1 mes a 2-8ºC. El reactivo 3 está listo para su uso.
4. Coger 3 tubos de ensayo y nombrarlos de la siguiente forma: BR (blanco reactivo), M, ST. Serán los tubos donde se depositarán los reactivos, el plasma y el estándar según el siguiente cuadro:
5. Con los reactivos 1 y 2 se separa el hierro de la transferrina, precipitada ésta se reduce el hierro de férrico a ferroso.
6. Mezclar y leer el tubo de la muestra frente al blanco de reactivo. El resultado corresponde al Blanco Muestra
7. A continuación añadir 1 gota del reactivo 3 en cada tubo
8. Mezclar e incubar 5 minutos. Leer frente al blanco reactivo.
9. Anotar los resultados de cada una de nuestras mediciones para realizar los cálculos necesarios.
CÁLCULOS Y RESULTADOS:
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