FUNDAMENTO
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianmetahemoglobina. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.
OBJETIVO:
Determinar la concentración de hemoglobina en una muestra de sangre.
UTILIDAD CLÍNICA:
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias.
Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.
MATERIALES NECESARIOS:
Tubos de ensayo
Tubos Eppendorf
Pipetas automáticas
Puntas de pipeta
Cubetas de fotometría
Gradilla
APARATAJE
Espectrofotómetro
REACTIVOS:
HEMOGLOBIN: ferricianuro de potasio, cianuro de potasio y dihidrógeno de potasio.
MUESTRA:
Sangre capilar o venosa.
PROCEDIMIENTO:
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 nm
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear:
4. Mezclar e incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC).
5. Leer la absorbancia (A) del calibrador y la muestra, frente al Blanco
de reactivo.
CÁLCULOS Y RESULTADOS:
Se considera que el valor esta dentro de la normalidad.
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