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PRÁCTICA Nº14: DIACLON ABO/D + REVERSE GROUPING


FUNDAMENTO:

Los antisueros anti-A y anti-B son necesarios, para demostrar la presencia o ausencia de los antígenos A / B en hematíes humanos.

La determinación de los grupos sanguíneos ABO requiere la realización de una contraprueba serológica o grupo inverso con plasma o suero para confirmar

los resultados obtenidos en la prueba hemática. [1]

Para la contraprueba serológica se utilizan hematíes con una especificidad antígeno-ABO conocida, para detectar la presencia o ausencia en el plasma o

suero de las isoaglutininas anti-A y anti-B. Una discrepancia entre la determinación del antígeno y la contraprueba exigen ampliar el estudio.

La tarjeta ID-Card ˝DiaClon ABO/D + Reverse Grouping˝ permite en una ID-tarjeta determinar el grupo hemático y el grupo sérico para ABO, así como la

determinación del antígeno RhD.


OBJETIVO:

Determinar los grupos sanguìneos ABO/Rh combinado con la prueba inversa o grupo sérico.


REACTIVOS:

  • anti-A monoclonal [línea celular A5]

  • anti-B [línea celular G½]

  • anti-D [líneas celulares LHM59 / 20 (LDM3) + 175-2]


MATERIAL EMPLEADO:

  • Micropipetas

  • Puntas de pipeta

  • Tubos para las suspensiones

APARATAJE

  • Centrífuga

Muestras

Para un resultado óptimo, la determinación debe realizarse con una muestra recién extraída, o cumpliendo la normativa local del laboratorio en cuanto a criterios de aceptabilidad de las muestras. Preferiblemente, las muestras de sangre deben recogerse utilizando citrato, EDTA o CPD-A como anticoagulante.

También es posible utilizar muestras recogidas en tubos sin anticoagulante.

Cuando sea necesario emplear suero en vez de plasma, el suero debe someterse a una centrifugación a 1500 g durante 10 minutos antes de su uso, para evitar la presencia de residuos de fibrina que podrían interferir con el patrón de reacción.


PROCEDIMIENTOS

Importante ponerse la bata y preparar el puesto de trabajo.

Preparación de la muestra de sangre

Para la determinación de ABO/D

Preparar una suspensión de hematíes al 5% en ID-Diluent 2 como sigue:

Dejar que el diluyente alcance la temperatura ambiente antes de su utilización.

1. Pipetar 0,5 ml de ID-Diluent 2 en un tubo limpio.

2. Agregar 50 μl de sangre total o 25 μl de concentrado de hematíes, mezclar cuidadosamente.

La suspensión de hematíes puede utilizarse inmediatamente.


Procedimiento de la prueba

  1. Agregar 50 μl plasma / suero del paciente en los microtubos 5 y 6. Se recomienda una incubación de 10 minutos a temperaura ambiente

  2. Agregar 10 ó 12,5 μl de la suspensión de hematíes del paciente en los microtubos 1–4 (A, B, D, ctl).

  3. Centrifugar la tarjeta ID-Card durante 10 minutos en la ID-Centrífuga.

  4. Leer y anotar las reacciones.

RESULTADOS

Positivo: Los hematíes aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del gel o están repartidos en el gel.

Negativo: Sedimento compacto de hematíes en el fondo del microtubo.



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