FUNDAMENTO/OBJETIVO
Se pondrá de manifiesto el Ag Du (Ag D débil) mediante prueba de coombs indirecta enfrentando hematíes problema a un suerto anti-D específico comercial y, posteriormente, al reactivo de AGH.
APARATAJE
Baño termostático.
Microscopio.
MATERIAL EMPLEADO
Material para lavado y dilución de hematíes.
Portaobjetos, cubreobjetos y tubo de hemólisis.
Pipeta Pasteur.
SSF
REACTIVOS:
AGH
Suero anti-D
MUESTRA:
Hematíes problema Rh-
PROCEDIMIENTOS
Importante ponerse la bata y preparar el puesto de trabajo.
Procedimiento 1:
Preparación de los Hematíes problema Rh-
Realizar un lavado y una dilución al 5% de los hematíes problema tipados Rh-
Efectuar prueba de Coombs directa sobre los hematíes problema tipados Rh-.
Procedimiento 2:
Determinación de Coombs Indirecto:
En un tubo de hemólisis depositar 2 o 3 gotas del reactivo anti-D
Añadir al tubo unas 2 o 3 gotas de la suspensión al 5% de hematíes problema Rh- y agitar suavemente.
Incubar la mezcla en baño termostático durante 15-30min
Lavar la mezcla con 1ml de SF.
Repetir este lavado 2 veces más.
Al sedimento obtenido con el último lavado añadir dos o tres gotas de AGH.
Centrifugar a 2.500rpm durante 1 minuto.
Resuspender el sedimento obtenido con el último lavado dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo; si es necesario, añadir unas gotas de SF.
Observar la presencia o ausencia de aglutinación en el visualizador, y si es necesario, en el microscopio.
RESULTADO
Presencia de aglutinación (+): Aparecen grumos rojos oscuros que flotan en el líquido.
Ausencia de aglutinación (-): Los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.
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