FUNDAMENTO
Esta técnica se basa en aglutinación en porta para la detección cualitativa y semicuantitativa de PCR en suero humano. Las partículas de látex recubiertas con anticuerpos anti-PCR humana son aglutinadas por moléculas de PCR presentes en la muestra del paciente.
OBJETIVO
Detención de PCR en el suero humano, ya que se incrementa en casos de procesos inflamatorios y/o procesos bacterianos, también incluimos neoplasias.
UTILIDAD CLÍNICA
La Proteína C-reactiva es una proteína de fase aguda, presente en el suero de pacientes sanos, la cual puede incrementarse significativamente en la mayoría de procesos infecciosos bacterianos y virales, tejidos dañados, inflamación y neoplasias malignas. El incremento de concentración de esta proteína se produce después de unas horas de desarrollarse la inflamación pudiendo alcanzar niveles de 300 mg/L en 12-24 horas, por tanto es útil la detección de esta proteína para el estudio y diagnostico de dichos procesos.
MUESTRA
Suero fresco. Estable 7 días a 2-8ºC o 3 meses a -20ºC.
REACTIVOS
Látex -> Suspensión de partículas látex cubiertas de IgG de cabra anti- PCR humana.
Control postivo (tapón rojo) -> Suero humano con una concentración de PCR > 20 mg/L.
Control negativo (tapón azul) -> Suero animal.
MATERIAL NECESARIO
Pipetas de 50 µL, con sus correspondientes pipetas.
Porta.
Vaso estéril de orina para desechos.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
Método cualitativo:
Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Depositar 50 µL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los controles Positivo y Negativo, sobre círculos distintos de un porta.
Mezclar el reactivo de PCR- látex vigorosamente o con el agitador vortex antes de usar. Depositar una gota (50 µL) junto a cada una de las gotas anteriores.
Mezclar las gotas con un palillo, procurando extender la mezcla por toda la superficie interior del círculo. Emplear palillos distintos para cada muestra.
Situar el porta sobre un agitador rotatorio a 80 – 100 r.p.m. y agitar durante 2 minutos. El exceso de tiempo puede originar la aparición de falsos positivos. También se puede rotar vigurosamente.
Metodo semicuantitativo:
Realizar diluciones de la muestra en SSF.
Proceder para cada dilución, como en la prueba cualitativa, es decir, añadiendo 50 µL de látex y 50 µL deSSF y 50 µL de muestra.
CALCULOS
6* título de PCR= 6*2= 12 mg/L
RESULTADO
Se observa aglutinación en la dilución 1/2 por lo que el titulo es 2 y aplicandole la fórmula la concentración aproximada es de 12 mg/L.
Cada laboratorio debe poner su valor de referencia, en este caso el valor de referencia es 6 mg/L, por lo que se encuentra un poco elevado.
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