PRÁCTICA Nº6: TINCIÓN ESPORAS. WRITZ

FUNDAMENTO

Esta tinción se emplea para la observación de esporas y también de las endosporas.

Las esporas son formas de resistencia producidas por algunas bacterias como Bacillus y Clostridium.

Estas ultimas son exclusivas de de alguno generos bacterianos. Se forman en el interior de la bacteria presentando varias capas impemeables, por lo que no pueden ser teñidas mediante tinciones simples o diferenciales. Para está tinción es necesaria la aplicación de la fuente de calor, ya que esta permite la penetración de los colorantes en la bacteria.

OBJETIVO

Visualizar y estudiar esporas y endosporas.

APARATAJE

Microscopio óptico Olympus.

MUESTRA

Cultivo de Bacilus Saprophyticus

REACTIVOS

Verde malaquita

Safranina o fucsina diluida.

MATERIAL NECESARIO

• Mechero Bunsen

• Asa de siembra

• Portaobjetos

• Paralelas

• Cubeta para tinciones

• Frasco lavador

• Papel de filtro

• Algodón

PROCEDIMIENTO

Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.

1. Preparar un frotis bacteriano con la muestra.

2. Sobre la rejilla o paralelas colocadas sobre el fregadero ponemos el porta con el frotis bacteriano, a continuación colocamos papel de filtro encima del porta por la cara del frotis y cubrimos con Verde malaquita durante 1 min.

3. Exponerlo a la fuente de calor (descrito en la anterior práctica) e ir pasándolo por debajo de los portas, hasta emisión de vapores, durante 5 min.*Es necesario añadir verde malaquita cada vez que se vea el preparado algo seco.

4. Quitar el papel de filtro y lavar con agua

5. Cubrir con safranina 1 minuto o con fucsina diluida 2-3 minutos

6. Lavar con agua destilada

7. Dejar secar el preparado

8. Observar al microscopio con objetivo de 100x

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Podemos observar esporas de color verde y las células vegetativas de color rosa o rojo. También podemos observar alguna endospora.