FUNDAMENTO
Esta técnica nos permite la identificación de bacterias ácido-alcohol resistentes BAAR, generalmente tienen forma de bacilos.
Estas poseen paredes bacterianas con ácidos grasos de cadena larga y ceras que las hacen resistentes a la decoloración, por tanto con la tinción de GRam unicamente se identificarian las Gram + y con esta tinción se pueden diferenciar.
Las bacteria ácido alcohol resistentes (BAAR) se observarán de un color rojo sobre fondo azul; y las no resistentes se observaran de color azul.
OBJETIVO
Identificar BAAR y estudiar la morfología.
UTILIDAD CLÍNICA
Entre la BAAR destacan las micobacterias como Mycobacterium tuberculosis y Mycobacterium leprae. Esta técnica es útil para el diagnóstico y estudio de estas enfermedades.
Debida a su alta patogenicidad no usamos este tipo de muestas.
APARATAJE
Microscopio óptico Olympus.
MUESTRA
Staphylococus aureus.
REACTIVOS
Alcohol.
Fucsina fenicada.
Decolorante (alcohol ácido).
Azul de metileno.
MATERIAL NECESARIO
Cubeta.
Algodón.
Asa de siembra de platino con mango de plástico.
Papel de filtro.
Paralelas.
Agua destilada en fraco lavador.
Mechero Bunsen.
Portaobjetos.
SSF
Aceite de inmersión.
Pinzas de madera
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes
Preparar un frotis con S. aureus.
Encima del porta por la cara donde se ha realizado el frotis ponemos papel de filtro y posteriormente cubrirlo con Fucsina fenicada durante 1 min.
Preparamos la fuente calor: cubrimos la punta del asa de siembra con algodón empapado en alcohol y en el fregadero colocamos una rejilla y aplicamos la fuente de calor. Mantener así 5 minutos. *Cada vez que veamos la preparación algo seca echar más fucsina*.
Quitamos el papel de filtro y lavamos la preparación con agua.
Decoloramos con alcohol-ácido 30 segundos.
Cubrimos con Azul de metileno (colorante de contraste) durante 1-2 minutos.
Lavamos con agua destilada
Dejamos secar.
Observar al microscopio con el objetivo de 100x.
RESULTADO Y OBSERVACIONES
En el caso del aureus observamos que no es BAAR.
En la siguiente imagen podemos diferencia en azul las no BAAR y en rojo las BAAR.
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