PRÁCTICA Nº4: TINCIÓN DE GRAM

FUNDAMENTO

La tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial, ya que nos ayuda a distinguir las bacterias Gram + y Gram -.

Las Gram + tiene una pared muy grueso y las Gram - tiene pared muy fina y una membrana externa.

OBJETIVO

Diferenciar en el microscopio las células Gram + y las Gram -.

APARATAJE

Microscopio

MUESTRA

• Staphulococus.

• Proteus.

REACTIVOS

• Cristal violeta, utilizado como colorante primario.

• Lugol, utilizado como mordiente.

• Alcohol-acetona.

• Safranian, utilizado como colorante de contraste.

MATERIAL NECESARIO

• Agua destilada.

• Portaobjetos.

• Mechero Bunsen.

• Pinzas de madera.

• Asa de siempre con mango de plástico.

• Cubeta.

• Paralelas.

PROCEDIMIENTO

Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.

1. Realizar un frotis sanguíneo mezclando el Staphylococus y el Proteus.

2. En la cubeta poner las paralelas de manera que el colorante sobrante caiga en la cubeta.

3. El porta debe estar en las parelelas con el lado del frotis hacia arriba. A continuación añadimos el primer colorante, Cristal violeta durante 1 min.

4. Lavar con agua destilada.

5. Añadir lugol y dejar durante 1 min.

6. Lavar con agua destilada.

7. Añadir el decolorante, Alcohol-cetona, durante 15-20 seg.

8. Lavar con agua destilada.

9. Añadir el colorante de contraste, Safranina durante 2 min aprox.

10. Lavar con agua destilada y dejar secar.

11. Observar con objetivo 100x en el microscopio, añadiendo una gotita de aceite de inmersión.

RESULTADO Y OBSERVACIONES

Podemos oservar en color morado las Gram + y en color Rosaceo muy claro las Gram -. En esta preparación se puede observar que no hay abundancia de Gram -.

En la siguiente imagen podemos distinguirlas con claridad.