OBJETIVOS:
Esta práctica engloba varios obejtivos entre los que destacamos:
Realizar extensiones o frotis bacterianas a partir de muestras sólidas y líquidas.
Realizar una tinción simple de bacterias y levaduras presentes en distintas muestras naturales.
Observar la morfología bacteriana y comenzar a distinguir los diferentes tipos de agrupaciones existentes.
Practicar con el microscopio empleando el máximo aumento aplicando aceite de inmersión, y regulando adecuadamente condensador y diafragma.
FUNDAMENTO:
El yogurt es un producto láctico producido por la fermentación natural de la leche. A nivel industrial la fermentación se realiza añadiendo a la leche una mezcla (3-4%)de Streptococcus termophilus, que produce poco ácido, pero es muy aromático y Lactobacilus bulgaricus, que es muy acidificante.
Las levaduras son hongos microscópicos unicelulares. En la industria son importantes su capacidad para realizar la fermentación de hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias como: pan, vino, cerveza (Saccharomyces cerevisiae), etc.
El sarro dental es un deposito consistente y adherente, formado por restos proteicos, sales minerales y bacterias que se localiza sobre el esmalte de los dientes. En la cavidad bucal abundan bacterias saprófitas, pudiéndose observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocbacilos, diplococs y bacilos.
APARATAJE
Microscopio
MATERIAL NECESARIO
Asa de platino.
Mechero Bunsen.
Portaobjetos.
Muestras bacterianas ( yogur, levadura, sarro dental, bacterias de la mano).
Pinzas de madera.
Hisopo.
REACTIVOS
Colorantes para tinción como:
Cristal violeta.
Safranian.
Azul de metileno.
PROCEDIMIENTO DE LA PREPARACIÓN DE UN FROTIS BACTERIANO
1. Extensión:
Colocar una pequeña gota de agua destilada en el porta, ya que es un medio sólido.
Con el asa de platino estéril transferir una pequeña cantidad del cultivo bacteriano en medio sólido a la gota. Para que el asa sea estéril hay que pasarla de forma vertical sobre la llama del mechero Bunsen.
Remover la mezcla con el asa hasat formas una suspensión homogénea y extenderla bien con el asa de forma circular.
2. Desecación:
Cogemos el porta con las pinzas de madera y hacemos movimientos celulares a unos 10 cm encima de la llama.
3. Fijación por calor:
Realizamos tres pases por la llama.
PROCEDIMIENTO DE TINCIÓN SIMPLE DE BACTERIAS DE YOGURT.
Sobre un porta desengrasado realizamos una extensión o frotis, tomando una mínima porción de yogur con el asa de platino.
Secar al aire.
Fijar con calor.
Teñir con safranina durante 2 minutos.
Secar la preparación.
Observar al microscopio con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
PROCEDIMIENTO DE TINCIÓN SIMPLE DE LEVADURAS.
En este caso usamos levura que diluyimos previamente al frotis.
Deporsitar un gota de la disolución de levura en el porta. No es necesario antes de depositar la gota de la disuloción añadir agua destilada ya que el frotis lo hacemos con medio líquido.
Secar al aire.
Fijar con calor.
Teñir con cualquiera de los colorantes nombrados anteriormente durante 2 min.
Secar la preparación.
Observar al microscopio con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
PROCEDIMIENTO DE TINCIÓN SIMPLE DE BACTERIAS DEL SARRO DENTAL.
Depositar una gota de agua destilada o SSF en el portaobjetos.
Con un hisopo estéril tomar una gota de agua y realizar la extensión o frotis.
Secar al aire.
Fijar con calor.
Teñir con cualquiera de los colorantes nombrados anteriormente durante 2 min.
Secar la preparación.
Observar al microscopio con 100x, poniendo una pequeña gota de aceite de inmersión.
Antes de realizar cualquier práctica se debe tener preparado el puesto de trabajo correctamente, y al finalizar la práctica hay que limpiar el puesto de trabajo con una mezcla de lejia, agua y jabón para desinfectar correctamente.
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