FUNDAMENTO
La prueba IMVIC, es una batería de pruebas que consiste en 4 pruebas: Indol, Rojo Metilo, Voges Proskauer y Citrato.
El Indol consiste en conocer si la bacteria es poseedora de la enzima triptofanasa. La triptofanasa es una enzima que degrada al triptófano, en esta degradación se libera Indol. Para detectar si una bacteria es capaz de degradar este aminoácido se utiliza un reactivo, el reactivo de Kovac, que reacciona con el Indol formando un compuesto de color rosa intenso.
El rojo metilo es una prueba que se realiza para determinar la capacidad de una bacteria de fermentar la glucosa por la vía ácido-mixta, con producción de ácido. Para detectar si se ha producido o no, se utiliza un indicador de pH de rojo de metilo.
La prueba de Voges Proskauer se realiza para determinar si la bacteria fermenta la glucosa por la vía butanodiólica. Para detectarlo, utilizamos α-naftol, que es un compuesto que reacciona con un producto intermedio de la fermentación butanodiólica, la acetona, para formar un compuesto color rojizo.
La prueba del Citrato consiste en sembrar la bacteria en medio Citrato. Con este medio podemos valorar si la bacteria es capaz de utilizar citrato como única fuente de carbono y compuestos amoniacales como única fuente de nitrógeno en su metabolismo. Se realiza sembrando en agar citrato de Simons, que contiene citrato de sodio y azul de bromotimol como indicador de pH.
MATERIALES
Papel de filtro. Gradilla.
Asa de siembra. Tubo con medio de agua de peptona.
Dos tubos con medio MRVP. Mechero Bunsen.
Mechero convencional. Pipeta Pasteur.
REACTIVOS
Agar citrato.
Reactivo de Kovac.
Rojo de metilo.
PROCEDIMIENTO
PRUEBA INDOL
1.- Tomamos un tubo de agua de peptona.
2.- Tomamos un inóculo de la bacteria y la disolvemos en el medio agua de peptona.
3.- A continuación, con una pipeta Pasteur, echamos 5 gotas del reactivo de Kovacs y mezclamos por rotación para que se mezcle bien.
4.- Esperamos de 1 – 2 minutos para leer el resultado.
PRUEBA ROJO METILO
1.- Tomamos un medio MRVP.
2.- Cogemos un inóculo de la bacteria y la disolvemos en el tubo de medio MRVP.
3.- Ponemos 5 gotas de rojo de metilo y mezclamos por rotación.
4.- Esperamos 1 – 2 minutos para ver el resultado de la prueba.
PRUEBA DE VOGES PROSKAUER.
1.- Tomamos un medio de MRVP.
2.- Cogemos un inóculo de la bacteria y lo disolvemos en el medio MRVP.
3.- Añadimos 12 gotas del reactivo α-naftol (VRB).
4.- A continuación, añadimos 4 gotas del reactivo potasa al 40%.
5.- Como la reacción necesita oxígeno para producirse, colocamos el tubo abierto inclinado sobre la gradilla como punto de apoyo.
6.- Esperamos durante 10 minutos para ver si se produce el color rojizo en el medio.
PRUEBA DEL MEDIO CITRATO
1.- Cogemos un medio citrato.
2.- Tomamos un inóculo con el asa de siembra de platino y sembramos el medio citrato.
3.- Lo ponemos a incubar y observamos el resultado al día siguiente.
LECTURA E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
PRUEBA DEL INDOL +
PRUEBA DE ROJO DE METILO +
VOGES PROSKAUER -
AGAR CITRATO +
Se corresponde con Proteus.
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