FUNDAMENTO
En esta serie de prácticas vamos a realizar las pruebas para la determinación de los cocos Gram –. Gracias a estas pruebas podremos determinar la especie bacteriana de una muestra problema. En nuestro caso, al ser unas prácticas de laboratorio, vamos a realizar las pruebas con distintas bacterias para observar como sería una prueba positiva y/o negativa.
En este caso estudiaremos la oxidasa que se basa en la capacidad que tienen algunos microorganismos, aerobios o anaerobios facultativos, de producir el enzima “citocromo oxidasa”, que cataliza, en la cadena respiratoria, la transferencia de electrones desde un sustrato orgánico hasta el oxigeno. Para poner de manifiesto la producción de este enzima se utiliza, como indicador, un compuesto (Tetrametil- p -fenilen diamina o reactivo de Kovacs) que se oxida en presencia de citocromo oxidasa transformándose en un producto coloreado.
OBJETIVO
Diferenciar los géneros Neisseria, Branhamella y Moraxella que son oxidasa (+) del género Acinetobacter (oxidasa -).
MUESTRA
Microorganismo oxidasa +.
REACTIVO
Kovacs
MATERIAL NECESARIO
Asa de siembra de platino con mango de plástico.
Portaobjetos.
Papel de filtro.
Mechero bunsen.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
Anterior a la siembra, se debe rotularla base de la placa con el nombre del microorganismo, nombre del técnico y fecha.
IMPORTANTE: realizar todo el procedimiento y mantener el material en las inmediaciones de la llama para evitar la contaminación.
Colocar un trozo de papel de filtro en un porta.
Agregar 2-3 gotas del reactivo de Kovacs en el centro del papel.
Extender una colonia, con el asa de siembra, sobre el papel impregnado.
Si la reacción es positiva se observa la aparición de color (violeta) a los 5-10 segundos.
RESULTADO Y OBSERVACIONES
En este caso la oxidasa es +, ya que aparece el color violeta en el papel.
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