FUNDAMENTO
En esta serie de prácticas vamos a realizar las pruebas para la determinación de los cocos Gram +. Con estas pruebas podremos determinar la especie bacteriana de una muestra problema.
En el caso de un estudiante de laboraratorio, como es en nuestro caso, utilizaremos distintas bacterias para observar si la prueba es positiva o negativa.
En este caso estudiaremos la prueba de la DNasa, que estudia la capacidad que tienen algunas bacterias para producir el enzima DNAsa, que produce la degradación del DNA que contiene el medio de cultivo.
OBJETIVO
Diferenciar las especies patógenas de Staphylococcus (DNAsa +) de las no patógenas (DNAsa -).
UTILIDAD CLÍNICA
La utilidad clínica se basa en el estudio de la patogenicidad del Staphylococcus.
MUESTRA
S. aureus.
S. epidermidis.
REACTIVOS
HCl 1 N (que precipita el DNA) .
Azul de toluidina.
APARATAJE
Estufa de 37ºC
MATERIAL NECESARIO
Mechero Bunsen
Asa de siembra con mango de plástico.
Placa de metri con medio DNasa.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
Anterior a la siembra, se debe rotularla base de la placa con el nombre del microorganismo, nombre del técnico y fecha.
IMPORTANTE: realizar todo el procedimiento y mantener el material en las inmediaciones de la llama para evitar la contaminación.
Dividimos la placa en dos, en un lado sembramos S. epidermidis y en el otro lado S.aureus.
Incubar a 37ºC unas 24h.
Tras la incubación se hace la lectura añadiendo ácido HCl 1 N o azul de toluidina al 1%, y observamos la aparición de zonas claras o coloreadas de rosa, respectivamente, alrededor de la zona sembrada.
RESULTADOS Y OBSERVACIONES
En la primera imagen se observa que la bacteria es DNasa + porque se ha comido el ADN contenido en el medio. El ac.clorhídrico revela la presencia de ADN del medio.
En la segunda imagen se observa alrededor zonas rosáceas, debidas al azul de toluidina. (Este paso no se ha echo en la práctica pero es interesante comprobarlo)
Comentarios