PRÁCTICA Nº11: SIEMBRA EN MEDIO DE CULTIVO SÓLIDO POR PICADURA

FUNDAMENTO

En algunas pruebas identificación bioquímicas, se realiza el crecimiento en superficie para que el microorganismo crezca en aerobiosis y, además, se hace una punción para el crecimiento en anaerobiosis en el fondo del tubo.

OBJETIVO

Diferenciación bioquímica, como la prueba de TSI.

MUESTRA

Enterobacterias

MATERIAL NECESARIO

• Tubos con medio de cultivo sólido inclinado.

• Mechero Bunsen

• Punzón con mango de pástico.

• Gradilla.

PROCEDIMIENTO

Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.

Anterior a la siembra, se debe rotular el tubo con el nombre del microorganismo, nombre del técnico y fecha.

IMPORTANTE: realizar todo el procedimiento y mantener el material en las inmediaciones de la llama para evitar la contaminación del medio de cultivo.

1. Colocar los tubos que se vayan a sembrar en una gradilla y rotularlos.

2. Esterilzar el punzón acercándolo a la llama del mechero hasta la incandescencia del filamento. Esperar que se enfrie en la boca del tubo.

3. Sostener con la mano no dominante el tubo en la que se encuentra la muestra de bacteria que se va a sembrar. Quitar el tapón con el dedo meñique de la mano dominante, manteniendolo en todo momento cerca de la llama.

4. Flamear ligeramente la boca del tubo.

5. Introducir el punzón y coger el inóculo.

6. Sacar el punzón del tubo evitando tocar las paredes del mismo.

7. Flamear la boca del tubo, cerrarlo y colocarlo en la gradilla.

8. Se introduce el punzón con el inóculo hasta el fondo del tubo.

9. Esterilizar el punzón con el mechero.

10. Incubar los tubos en la estufa a 37ºC durante 24 horas.

RESULTADOS Y OBSERVACIONES

Tras la incubación se observa el crecimiento de microorganismos anaerobios en el fondo del tubo, alejados de la superficie; o aerobios creciendo en la superficie del tubo.

*ERRORES: uno de los errores comunes, por lo que no se produce el crecimiento de los microorganismos se produce cuando esterilizamos el punzón. Este puede que no este suficientemente frío y queme los microorgmanismos.*