FUNDAMENTO
Separación e identificación de sustancias químicas disueltas en un disolvente ( fase móvil) que se mueve sobre una capa delgada de un absorbente idóneo(fase estacionaria).
OBJETIVO
Realizar una separación e identificación de los aminoácidos triptófano, alanina, valina y arginina presentes en una muestra mediante una cromatografía de capa fina ascendente.
UTILIDAD CLÍNICA
Hay enfermedades clínicas en las que se produce una alta concentración de aminoácidos en el plasma y la orina, es decir, aminoaciduría. Este método se emplea para estudiar dicho desequilibrio.
REACTIVOS
Disolvente de cromatografía.
Disolución reveladora de ninhindrina 0,2 %.
MUESTRA
Muestra problema con una mezcla desconocida de aminoácidos.
Muestra patrón de aminoácidos.
MATERIAL NECESARIO
Laminas de gel de celulosa.
Vaso de precipitado.
Micropipeta.
Atomizador.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
1. Colocar el disolvente en la cubeta de fondo que cubra el fondo hasta una altura de 1cm .
2. Coger una placa de gel de celulosa manipularla con guantes y por los bordes, con un lápiz marcamos los puntos donde se aplicarán las muestras a 1.5 de la base y separados 1cm.Aplicamos 2 μL y patrones de la muestra suavemente sobre el punto señalado , secamos y volvemos a repetir el procedimiento.
3. Una vez que las manchas se han secado al aire introducimos la placa de forma vertical en la cubeta ponemos la tapa y dejamos que el disolvente suba por capilaridad durante media hora.
4.Una vez el disolvente ha subido aproximadamente 8 cm sacamos la placa y marcamos hasta donde ha llegado la fase móvil y dejamos secar al aire.
5. Cuando la placa esta seca la pulverizamos con nihidrina.
6. Calentar la placa a 105 grados y vemos como las manchas de los aminoácidos de color rosáceo aparecen a lo largo del gel.
RESULTADOS Y CÁLCULOS
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