FUNDAMENTO
En medio alcalino, las proteínas dan un intenso color violeta azulado en presencia de sales de cobre; contiene yoduro como antioxidante. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de proteína total en la muestra ensayada .
OBJETIVO
Determinar cauntitativamente las proteínas totales a través del suero.
UTILIDAD CLÍNICA
Su determinación es útil en la detección de:
Hiperproteinemia producida por hemoconcentración, deshidratación o aumento en la concentración de proteínas especificas.
Hipoproteinemia por hemodilución debida a un defecto en la síntesis proteica, perdidas excesivas (hemorragias) o catabolismo proteico excesivo.
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Byosystem BTS-310 .
Refractómetro.
REACTIVOS
R Biuret:
Potasio sodio tartrato.
Yoduro sódico
Yoduro de potasio
Sulfato de cobre (II)
Hidróxido de sodio
T PROTEIN CAL:
Patrón primario de Albúmina Bovina.
MATERIAL NECESARIO:
Micripipetas.
Pipetas de 1 ml.
Tubos de ensayo.
Cubetas.
Gradillas
Agua destilada.
MUESTRA
Suero
PROCEDIMIENTO
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 540 (530 -550) nm
Cubeta: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 cm paso de luz.
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC / 15-25ºC
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipetear en una cubeta:
Blanco: 1ml de R.
Patrón: 1ml de R y 25 μl de patrón.
Muestra: 1 ml de R y 25 μl de muestra.
4. Mezclar e incubar 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a Tª ambiente.
5. Leer la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 30 minutos.
CALCULOS Y RESULTADOS
Patrón: 1,122 A.
Muestra: 1,088 A.
Con el refractómetro los valores son: 7,2 g/dl
(0,1,088*7)/ 1,122 = 6,78 g/dl.
Resultado dentro de los valores normales,
Valores normales:
Adultos :6,6-8,3 g/dl.
Recien nacidos: 5,2-9,1 g/dl.
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