PRÁCTICA Nº4: CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS EN ORINA CON ÁCIDO SULFOSALICÍLICO POR TURBIDIMETRÍA

FUNDAMENTOS

La adicción de sulfosalicílico a una solución de proteínas actúa sobre estas, dando lugar a la aparición de un fino precipitado en suspensión. Este precipitado se observa como una turbidez blanquecina cuya intensidad puede ser cuantificada por turbidimetría.

OBJETIVO

Cuantificar la concentración de proteínas presentes en la orina.

UTILIDAD CLÍNICA

Se utiliza el método de inmunoturbidimetría en la estimación de las estructuras proteicas de tipo sérico que no pueden ser detectadas mediante otras técnicas clínicas.

APARATAJE

• Espectofotómetro de absorción Thermo electron.

REACTIVOS

• Suero salino fisiológico (0,9 g/dl).

• Ácido sulfosalicílico al 3% (p/v).

• Patrón de proteínas (7 g/dl).

• Albumina bovina.

MUESTRA

• Orina centrifugada (5' a 2000 rpm). Usar el sobredanante.

MATERIAL NECESARIO

• 7 tubos de ensayo de 5 ml.

• Pipetas automáticas con capacidades de 200, 100, 50, y 25 μl.

• Cubetas de fotometría.

PROCEDIMIENTO

Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.

1. Rotulamos los tubos:

BR (blanco de reactivo): tubo 5 ml.

BM (blanco de muestra): tubo 5 ml.

P1, P2, P3, P4 : patrones tubos de 5 ml.

PB (problema): tubo de 5 ml.

2. En tubos de mayor tamaño preparamos las siguientes disoluciones:

D1 -> 1/50 (0,2 ml de patrón + 9,8 ml de SSF) ---- 140 mg/dl.

D2 -> 1/100 ( 0,1 ml de patrón + 9,9 ml de SSF) --- 70 mg/dl.

D3 -> 1/200 (0,005 ml de patrón + 9,95 ml SSF) --- 35 mg/dl.

D4 -> 1/400 (0,025 ml de patrón + 9, 975 ml SSF) --- 17,5 mg/dl.

3. A continuación rellenamos los tubos que hemos rotulado antes.

BR: 0,5 ml de SSF y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

P1: 0,5 ml de D1 y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

P2: 0,5 ml de D2 y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

P3: 0,5 ml de D3 y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

P4: 0,5 ml de D4 y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

BM: 2 ml de SSF y 0,5 ml de Orina.

PB: 0,5 ml de Orina y 2 ml de A. Sulfosalicílico.

4. Agitar los tubos por inmersion y seguidamente trasnferimos el contenido a las cubetas de espectofotometría.

5. Seleccionamos la longitud de onda, 660 nm y procedemos a:

6. Ajustar a cero el fotómetro con el BR.

7. Medir la absorbancia de P1, P2, P3 y P4.

8. Ajustar a cero el fotómetro con el BM.

9. Medir la absorbancia de PB.

RESULTADOS

P1: 1,073 A.

P2: 0,888 A.

P3: 0,259 A.

P4 : 0,111 A

BM : 0

Al medir el blanco de muestra, hubo un error. La composición del blanco de muestra no era correcta ya que por error se le añadió ácido.

Tras encontrar el error y corregirlo procedimos a las siguientes mediciones.

PB1: 0,582.

PB2: 0,801.