8/10/18
OBJETIVOS
Esta practica la realizamos con el objetivo de determinar el nivel de glucosa por el método de la oxidasa-peroxidasa.
FUNDAMENTO
La hexokinasa (HK) cataliza la fosforilación de la glucosa por ATP a glucosa-6-fosfáto (G6F). La G6F originada es reducida a 6-fosfogluconato en presencia de glucosa-6-fosfato deshidrogenasa con reducción paralela de NAD a NADH. El aumento de ésta en el medio es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra.
UTILIDAD CLÍNICA
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células presentes en el organismo, la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucémia, causada por un déficit de insulina. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R1 (tampón) TRIS pH 7,4
Fenol
R2 (enzima) Glucosa oxidasa (GOD)
Peroxidasa (POD)
4-Aminodenazona (4-AF)
GLUCOSE CAL Patrón primario acuoso de glucosa.
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Byosystem BTS-310
Espectofotómetro de absorción Thermo electron.
MATERIAL NECESARIO
3 Cubetas de 1 cm de paso de luz.
Micropipetas de 10 y 100 μl
Puntas de pipetas correspondientes a las medidas.
Muestra (orina alterada con glucosa).
PROCEDIMIENTO.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda...........340 nm.
Cubeta...........................1 cm paso de luz.
Temperatura.................37ºC.
2. Ajustar el espectofotómetro a 0 con el blanco.
3. Pipetear en una cubeta:
-Blanco: 1mL RT
-Patrón: 1 mL RT y 10 μl Patrón.
-Muestra: 10 μl de muestra y 1 mL de RT.
4. Mezclar e incubar a 5 min a 37ºC o 10 min a T ambiente.
5. Leer la absorbancia del patrón (A) y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
CALCULOS
En este caso los resultados son los siguinetes:
Absorbancia del patrón= 0,509 A
Absorbancia de la muestra= 0,887
[(A) muestra- (A) blanco] *100/(A) patrón - (A) blanco.
(0,887*100)/0,509= 174,26 mg/dL.
RESULTADOS
Los valores normales se deben encontrar entre 80-110 mg/dL, en este caso el resultado sale aumentado, 174,26 mg/dL, ya que la muestra estaba alterada para que saliese este resultado.
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