OBJETIVOS
Esta practica la realizamos con el objetivo de determinar el nivel de glucosa por el método de la oxidasa-peroxidasa.
FUNDAMENTO
La glucosa oxidasa (GOD) cataliza la oxidación de la glucosa a ácido glucónico. El peróxido de hidrógeno producido se detecta mediante un aceptor cromógeno de oxígeno, fenol-empirona en presencia de peroxidasa (POD).
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de glucosa presente en la muestra ensayada.
UTILIDAD CLÍNICA
La glucosa es la mayor fuente de energía para las células presentes en el organismo, la insulina facilita la entrada de glucosa en las células.
La diabetes mellitus es una enfermedad que cursa con una hiperglucémia, causada por un déficit de insulina. El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
R1 (Tampón) TRIS pH 7,4
Fenol
R2 (Enzima) Glucosa oxidasa (GOD)
Peroxidasa (POD)
4- Aminolenazona (4-AF)
GLUCOSE CAL Patrón primario acuoso de glucosa
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Byosystem BTS-310
Espectofotómetro de absorción Thermo electron.
MATERIAL NECESARIO
3 Cubetas de 1 cm de paso de luz.
Micropipetas de 10 y 100 μl
Puntas de pipetas correspondientes a las medidas.
Muestra (orina alterada con glucosa).
PROCEDIMIENTO.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda...........505 nm.
Cubeta...........................1 cm paso de luz.
Temperatura.................37ºC.
2. Ajustar el espectofotómetro a 0 con el blanco.
3. Pipetear en una cubeta:
-Blanco: 1mL RT
-Patrón: 1 mL RT y 10 μl Patrón.
-Muestra: 10 μl de muestra y 1 mL de RT.
4. Mezclar e incubar a 10 min a 37ºC o 30 min a T ambiente.
5. Leer la absorbancia del patrón (A) y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
CÁLCULOS
(A) Muestra*100/(A) patrón= mg/dl de glucosa.
0,775*100/0,367= 211,17 mg/dl de glucosa.
RESULTADOS
El resultado normal está entre 60-110 mg/dl. En este caso los niveles en mi muestra han salido elevados por que la muestra estaba alterada, añadiendole glucosa.
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