PRINCIPIO DEL MÉTODO
La alanina aminotrasferasa (ALT) inicialmente llamada transaminasa glutámico pirúvica (GPT) cataliza la transferencia reversible de un grupo amino de la alanina al α-cetoglutarato con formación de glutamato y piruvato. El piruvato producido es reducido a lactato en presencia de lactato deshidrogenasa (LDH) y NADH
SIGNIFICADO CLÍNICO
La ALT es una enzima intracelular, se encuentra principalmente en las células del hígado y el riñón. Su mejor aplicación es en el diagnóstico de las enfermedades del hígado. Se observan niveles elevados en enfermedades hepáticas como la hepatitis, enfermedades de los músculos y traumatismos. Cuando se emplean en conjunción con la AST ayuda en el diagnóstico de infartos de miocardio, ya que el valor de la ALT se mantiene dentro de los límites normales y aumenta en los niveles de AST1,4,5. El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
OBJETIVO
Determinación cuantitativa de alanina aminotransferasa GPT (ALT).
REACTIVOS
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS
Reactivo de trabajo:
Disolver un compirimido de R2 substrato en un vial de R1
Disolver un comprimido de R2 substrato en 15ml de R1
Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido.
Estabilidad: 21 días a 2-8ºC o 72 horas a temperatura ambiente (15-25ºC).
MATERIAL EMPLEADO
Cubetas
Pipetas automáticas con sus puntas correspondientes
MUESTRA
Suero o plasma.
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes
1. Condiciones del ensayo: Longitud de onda: 340 nm
Cubeta: 1 cm paso de luz
Temperatura constante 25ºC / 30ºC / 37ºC 2.
Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada o aire.
3. Pipetear en una cubeta:
RT: 1 ml
Muestra: 100 µ l
4. Mezclar, incubar 1 minuto.
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el cronómetro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos.
6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto (ΔA/min).
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