FUNDAMENTOS
Los triglicéridos incubados con lipoproteinlipasa (LPL) liberan glicerol y ácidos grasos libres.
El glicerol es fosforilado por glicerolfosfato deshidrogenasa (GPO) y ATP en presencia de glicerol quinasa (GK) para producir glicerol-3-fosfato (G3P) y adenosina-5-difosfato (ADP).
El G3P es entonces convertido a dihidroxiacetona fosfato (DAP) y peróxido de hidrógeno (H2O2) por GPO. Al final, el peróxido de hidrógeno (H2O2) reacciona con 4-aminofenazona (4-AF) y p-clorofenol, reacción catalizada por la peroxidasa (POD) dando una coloración roja.
UTILIDAD CLÍNICA:
Los triglicéridos son grasas que suministran energía a la célula.
Al igual que el colesterol, son transportados a las células del organismo por las lipoproteínas en la sangre.
Una dieta alta en grasas saturadas o carbohidratos puede elevar los niveles de triglicéridos.
Su aumento es relativamente inespecífico.
Diversas dolencias, como ciertas disfunciones hepáticas (cirrosis, hepatitis, obstrucción biliar) o diabetes mellitus, pueden estar asociadas con su elevación.
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica se basa en la determinación de la concentración de triglicéridos que hay en suero.
MUESTRA
Suero o plasma heparinizado.
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Thermo electron.
REACTIVOS
MATERIAL EMPLEADO
Cubetas
Pipeta automatica con sus puntas correspondientes.
Tubos de ensayo
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 505 (490-550) nm
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
Temperatura: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC / 15-25ºC
2. Ajustamos el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada.
3. Pipeteamos en una cubeta:
4. Mezclamos e incubamos 5 minutos a 37ºC o 10 minutos a temperatura ambiente.
5. Leemos la absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo.
* En esta práctica he utilizado dos muestras, pero los cálculos se harán solo con una.
RESULTADO Y CÁLCULOS
A muestra= 0,123
A patrón= 0,167
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