FUNDAMENTO
El colesterol presente en la muestra origina un compuesto coloreado. La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de colesterol presente en la muestra ensayada.
UTILIDAD CLÍNICA
El colesterol es una sustancia grasa presente en todas las células del organismo. El hígado produce naturalmente todo el colesterol que necesita para formar membranas celulares y producir ciertas hormonas.
El aumento del nivel de colesterol es uno de los principales factores del riesgo cardiovascular.
OBJETIVO
El objetivo de esta práctica no es sino la determinación de niveles de colesterol para un diagnóstico y clasificación de lipemias.
REACTIVOS
R1 (Tampón): PIPES y Fenol.
R2 (Enzimas): Colesterol esterasa (CHE), Colesterol oxidasa (CHOD), Peroxidasa (POD) y 4-Aminofenazona (4-AF).
CHOLESTEROL CAL: patrón primario acuoso de Colesterol y Triton X-114 10-15%
*Hay que tener especial preacaución con el patrón primario, ya que, produce vapores muy inflamables, lesiones oculares graves y es produce efectos nocivos duraderos para los organismos acuáticos.
APARATAJE
Espectofotómetro de absorción Thermo electron
MATERIAL NECESARIO
Cubetas
Pipeta automatica con sus puntas correspondientes.
Tubos de ensayo
PROCEDIMIENTO
Antes de empezar la realización de la práctica, el puesto de trabajo debe de estar adecuadamente preparado con los materiales necesarios y sin olvidar la bata y guantes.
1. Condiciones del ensayo:
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . 505 nm (500-550)
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .1 cm paso de luz
Temperatura . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC /15-25ºC
2. Ajustamos el espectrofotómetro a 0 frente a agua destilada.
3. Pipeteamos en una cubeta:
4. Mezclamos e incubamos 5 min a 37ºC o 10 min a 15-25ºC.
5. Leemos la absorbancia (A) del patrón y la muestra, frente al Blanco de reactivo. El color es estable como mínimo 60 minutos.
CÁLCULOS
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